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“T4 DNA连接酶”参数说明
| 类别： | 分子生物学工具酶 | 用途1： | 粘性末端连接 |
| 用途2： | 平末端连接 |
“T4 DNA连接酶”详细介绍
概述：
该酶催化契合的双链DNA或RNA的5′-磷酸末端和3′-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口(1)。
来源：
纯化自重组E. coli菌株。
应用：
1. 限制性酶切片段的克隆(2)。
2. 将linker或adaptor连接到DNA片段的平滑末端。
反应条件：
1× T4 DNA连接酶反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25°C)，10 mM MgCl2，10 mM DTT，1 mM ATP]，16°C温育。
质量检测:
核酸外切酶活性：50 μl不含ATP的反应体系中，3,200 U本酶与1 μg的Hind III消化的λDNA在37°C下温育4小时，DNA的电泳条带无明显变化。
核酸内切酶活性：50 μl不含ATP的反应体系中，3,200 U本酶与1 μg的pUC19质粒于37°C下温育4小时，<5%的pUC19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
纯度：经SDS-PAGE (考马斯亮蓝染色) 检测其纯度大于95%。
质保声明：
T4 DNA连接酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
单位定义：
(粘性末端连接活性定义)：20 μl T4 DNA连接酶反应体系中，0.12 μM 5‘末端浓度，16°C反应30分钟，能使50%经Hind III消化的λDNA片段连接所需的酶量定义为一个活性单位。
热失活：
65°C温育10分钟即可失活。
参考文献:
1. Engler, M.J. and Richardson, C.C. (1982). In P.D. Boyer (Ed.), The Enzymes Vol. 5, (p. 3). San Diego: Academic Press.
2. Sambrook, J., et al. (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (3rd ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press.
该酶催化契合的双链DNA或RNA的5′-磷酸末端和3′-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口(1)。
来源：
纯化自重组E. coli菌株。
应用：
1. 限制性酶切片段的克隆(2)。
2. 将linker或adaptor连接到DNA片段的平滑末端。
反应条件：
1× T4 DNA连接酶反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25°C)，10 mM MgCl2，10 mM DTT，1 mM ATP]，16°C温育。
质量检测:
核酸外切酶活性：50 μl不含ATP的反应体系中，3,200 U本酶与1 μg的Hind III消化的λDNA在37°C下温育4小时，DNA的电泳条带无明显变化。
核酸内切酶活性：50 μl不含ATP的反应体系中，3,200 U本酶与1 μg的pUC19质粒于37°C下温育4小时，<5%的pUC19质粒由超螺旋变为缺刻状态。
纯度：经SDS-PAGE (考马斯亮蓝染色) 检测其纯度大于95%。
质保声明：
T4 DNA连接酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
单位定义：
(粘性末端连接活性定义)：20 μl T4 DNA连接酶反应体系中，0.12 μM 5‘末端浓度，16°C反应30分钟，能使50%经Hind III消化的λDNA片段连接所需的酶量定义为一个活性单位。
热失活：
65°C温育10分钟即可失活。
参考文献:
1. Engler, M.J. and Richardson, C.C. (1982). In P.D. Boyer (Ed.), The Enzymes Vol. 5, (p. 3). San Diego: Academic Press.
2. Sambrook, J., et al. (2001). Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (3rd ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press.